| EL FACTOR TISULAR (FT) ES UNA GLICOPROTEINA DE TRANSMEMBRANA QUE INICIA LA VIA EXTRINSECA DE LA CASCADA DE COAGULACION Y ACTUA COMO RECEPTOR Y COFACTOR ENZIMATICO DEL FACTOR VII. ADEMAS EL FT HA SIDO DIRECTAMENTE RELACIONADO CON LA AGRESIVIDAD DEL CANCER. EN NUESTRO LABORATORIO SE DEMOSTRO QUE EGF AUMENTA LOS NIVELES DE EXPRESION DE FT EN LA LINEA CELULAR DE CANCER DE ENDOMETRIO ISHKAWA, Y QUE PROGESTERONA LO HACE EN LA LINEA CELULAR DE CANCER DE MAMA ZR-75, JUNTO CON LA ACTIVIDAD PROCOAGULANTE (PCA) Y EL POTENCIAL METASTASICO DE AMBAS LINEAS CELULARES. EN DIVERSOS TIPOS CELULARES EL FT SE ENCUENTRA LOCALIZADO Y FUNCIONALMENTE ACTIVO EN LA MEMBRANA CELULAR Y EL "INHIBIDOR DE LA VIA DEL FT" (TFPI) REGULA NEGATIVAMENTE LA ACTIVIDAD DE FT INDUCIENDO UNA REDISTRIBUCION DEL COMPLEJO CUATERNARIO (TFPI-TF-FVIIA-FXA) A MICRODOMINIOS DE MEMBRANA TIPO CAVEOLA, DONDE PERMANECE INACTIVO. TAMBIEN ES CONOCIDO QUE LA PERDIDAD DE LA CAVEOLINA-1, PRINCIPAL PROTEINA ESTRUCTURAL DE LAS CAVEOLAS, PUEDE FAVORECER LA AGRESIVIDAD DE LAS CELULAS DE CANCER. EN BASE A LO ANTERIOR, PROPONEMOS QUE TFPI REQUIERE DE LA PRESENCIA DE CAVEOLINA-1 PARA FAVORECER LA DISTRIBUCION DEL COMPLEJO TF-FVII-FX-TFPI A MICRODOMINIOS ENRIQUECIDOS EN COLESTEROL PARA INHIBIR LA ACTIVIDAD PROCOAGULANTE Y EL POTENCIAL INVASIVO DE LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA ZR-75 Y ENDOMETRIO ISHIKAWA. PARA ESTO, DETERMINAMOS LA DISTRIBUCION Y PAPEL BIOLOGICO DEL FATOR TISULAR DESPUES DEL TRATAMIENTO CON TFPI EN LAS LINEAS CELULARES ZR-75 E ISHIKAWA, EN PRESENCIA Y AUSENCIA DE LA PROTEINA CAVEOLINA-1. EN AMBAS LINEAS CELULARES EL FT SE DETECTO PRINCIPALMENTE EN FRACCIONES PESADAS DE MEMBRANA, MIENTRAS QUE EN PRESENCIA DE TFPI SE REDISTRIBUYO PARCIALMENTE A MICRODOMINIOS DE LA MEMBRANA INSOLUBLES EN DETERGENTE EN FORMA INDEPENDIENTE DE LA EXPRESION DE CAVEOLINA-1, Y EN LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA EN FORMA INDEPENDIENTE DE LA PRESENCIA DE LOS LIGANDOS DEL FT. ADEMAS, TFPI REDUJO DE FORMA SIGNIFICATIVA LA PCA DE LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA ZR-75 Y DE ENDOMETRIO ISHIKAWA, TAMBIEN DE MANERA INDEPENDIENTE DE LA PRESENCIA DE CAVEOLINA-1. AL ANALIZAR LA PCA DE FT EN CADA UNA DE LAS FRACCIONES PROVENIENTES DE LA GRADIENTE DE SACAROSA, SE ENCONTRO QUE LA MAYORIA DE LA PCA PROVENIA DE LOS MICRODOMINIOS DE MEMBRANA ENRIQUECIDOS EN COLESTEROL, DONDE NO SE DETECTO FT POR WESTERN BLOT, RESULTADO CONTRARIO A LO QUE SE ESPERABA. ENSAYOS CON ANTICUERPOS NEUTRALIZANTES DE FT EN ESTOS MICRODOMINNIOS DE MEMBRANA ELIMINARON LA PCA, INDICANDO QUE ESTA ES DEPENDIENTE DE FT. ADEMAS, EN LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA, TFPI REDUJO DE FORMA SIGNIFICATIVA LA PCA EN TODAS LAS FRACCIONES SUGIERIENDO QUE NO REQUIERE DE LA REDISTRIBUCION DE FT A MICRODOMINIOS RICOS EN CAVOLINA-1 PARA INHIBIR LA ACTIVIDAD DE FT. LA APLICACION DE BETA-METHILCICLODEXTRINA REDUJO PARCIALMENTE LA PCA DETECTADA EN LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA, LO QUE SUGIERE LA PARTICIPACION DE ESTOS MICRODOMINIOS DE MEMBRANA PARA LA ACTIVIDAD DE FT. DEBIDO A QUE LAS FRACCIONES DE MEMBRANA ENRIQUECIDAS CON FT NO MOSTRARON LA PCA ESPERADA, ES POSIBLE QUE ESTE FT SE ENCUENTRE ENCRIPTADO EN LA MEMBRANA CELULAR, LO CUAL SUPRIMIRIA LA PCA MEDIADA POR FT. PARA VERIFICAR ESTA HIPOTESIS, REALIZAMOS EXPERIMENTOS EN PRESENCIA DE IONOFOROS DE CALCIO, LOS CUALES DESENCRIPTAN EL FT PRESENTE EN LA MEMBRANA. EL TRATAMIENTO CON EL IONOFORO DE CALCIO AUMENTO PARCIALMENTE LA PCA DE LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA INTACTAS; QUEDA POR DETERMINAR A QUE FRACCIONES CORRESPONDE ESTE AUMENTO. POR OTRO LADO, EL TFPI REDUJ EL POTENCIAL INVASIVO DE LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA Y ENDOMETRIO; EN EL PRIMER CASO, ESTA INHIBICION FUE INDEPENDIENTE DE LA EXPRESION DE CAVEOLINA-1, MIENTRAS QUE EN LAS CELULAS ENDOMETRIALES, EL PROCESO DE INVASION FUE DEPENDIENTE DE LA EXPRESION DE CAVEOLINA-1. ADEMAS, OBSERVAMOS QUE EL TRATAMIENTO CON TFPI POR 24 HORAS REDUJO LOS NIVELES DE PROTEINA DE FT EN LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA ZR-75, LO QUE PODRIA CORRESPONDER AñoTRA FORMA EN QUE TFPI REDUCIRIA LA INVASION EN ESTAS CELULAS. EN RESUMEN LOS RESULTADOS REVELARON QUE, TFPI INHIBE LA ACTIVIDAD PROCOAGULANTE DE LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA Y ENDOMETRIO EN AUSENCIA DE CAVEOLINA-1 Y SIN QUE OCURRA REDISTRIBUCION DEL FT. ADEMAS, SE DEMOSTRO QUE LA INHIBICION DEL POTENCIAL INVASIVO DE LAS CELULAS DE CANCER DE MAMA INDUCIDA POR TFPI ES INDEPENDIENTE DE LA PRESENCIA DE CAVOLINA-1, MIENTRAS QUE VAVEOLINA-1 RESULTO SER IMPORTANTE PARA QUE SE MANIFIESTE EL AUMENTO DE POTENCIAL INVASIVO DEPENDIENTE DE EGF, EN LAS CELULAS DE CANCER DE ENDOMETRIO. POR OTRO LADO, SE DEMOSTRO QUE LA ACTIVIDAD POCOAGULANTE DEPENDIENTE DE FT SE CONCENTRA EN LOS MICRODOMINIOS DE MEMBRANA ENRIQUECIDOS EN COLESTEROL, PERO NO SE RELACIONA CON LOS NIVELES DE FT. EN CONSECUENCIA, SE SUGIERE QUE TFPI PODRIA SER UTIL COMO AGENTE TERAPEUTICO EN LOS DOS TIPOS DE CANCER ESTUDIADOS, YA QUE REDUCE DE FORMA SIGNIFICATIVA LOS PRINCIPALES EVENTOS QUE CAUSAN LA MUERTE DE LOS PACIENTES, EL POTENCIAL INVASIVO Y COAGULANTE. |