| LA ENFERMEDAD DE NEIMANN PICK TIPO C (NPC) ES UNA ENFERMEDAD LISOSOMAL NEURODEGENERATIVA PEDIATRICA MORTAL, CAUSADA POR MUTACIONES EN LOS GENES NPC1 Y NPC2. NPC1 ES UNA PROTEINA LISOSOMAL DE TRANSMEMBRANA Y NPC2 ES UNA PROTEINA SOLUBLE DEL LOSOSOMA QUE ES CAPAZ DE UNIR COLESTEROL. LAS CELULAS CON FENOTIPO NPC PRESENTAN ALTERACIONES EN EL TRAFICO DE VESICULAS Y ACUMULAN GRAN CANTIDAD DE COLESTEROL LIBRE Y OTROS LIPIDOS EN LOS LISOSOMAS. LOS PACIENTES NPC PRESENTAN UNA REAPIDA MUERTE NEURONAL, PRINCIPALMENTE DE LAS NEURONAS CEREBELARES DE PURKINJE. HASTA EL MOMENTO NO EXISTE UN TRATAMIENTO DISPONIBLE PARA ESTA TERRIBLE ENFERMEDAD. SE HAN DESCRITO LA PRESENCIA DE MARCADORES DE APOPTOSIS EN LA MUERTE NEURONAL EN NPC. CULTIVOS PRIMARIOS DE NEURONAS TRATADAS CON U18666A, DROGA QUE PRODUCE LA ACUMULACION INTRACELULAR DE COLESTEROL AL IGUAL QUE LO QUE OCURRE EN NPC, PRESENTAN ESTRES OXIDATIVO, ACTIVACION DE CASPASA 3 Y APOPTOSIS. TANTO LAS NEURONAS DEL MODELO MURINO DE NPC COMO DE PACIENTE NPC PRESENTAN FRAGMENTACION DE LOS NUCLEOS Y MARCA POSITIVA PARA TUNEL EN LA CORTEZA Y EL CEREBELO. UNA PREGUNTA IMPORTANTE QUE SURGE ES �CUAL ES LA RELEVANCIA DE LA APOPTOSIS EN LA NEURODEGENERACION EN NPC? EN ESE SENTIDO, PARECE PROBABLE LA PARTICIPACION DE FACTORES DE TRANSCRIPCION PRO APOPTOTICOS TEMPRANOS EN LA TRANSDUCCION DE SEÑALES QUE CAUSAN APOPTOSIS EN NPC. P73 ES UN MIEMBRO DE LA FAMILIA DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION P53 QUE REGULA LA MUERTE NEURONAL. LA FOSFORILACION DE P73 POR LA QUINASA C-ABL ES EL PRINCIPAL MECANISMO DE REGULACION DE LA P73, AUMENTANDO LOS NIVELES DE LA PROTEINA. LA PROTEINA C-ABL ES ACTIVADA POR DISTINTOS TIPOS DE ESTIMULOS PROAPOPTOTICOS, INCLUYENDO EL DAÑO AL DNA Y EL ESTRES OXIDATIVO. LA RELACION ENTRE LA NEURODEGENERACION EN NPC, LA ACTIVACION DEL MODULO C-ABL/P73 Y EL ESTRES OXIDATIVO NO HA SIDO ESTUDIADA. EN ESTA TESIS SE ESTUDIO ESTA RELACION UTILIZANDO DISTINTOS MODELOS DE NPC: (I) NEURONAS HIPOCAMPALES DE RATA TRATADAS CON U18666A, (II) CELULAS N2A CON UNA BAJA EXPRESION DE NPC1 INDUCIDA POR TRANSFECCIONES CON SHRNA Y (III) EL MODELO IN VIVO DE LA ENFERMEDAD, RATONES NPC (NPC1-/-). SE ENCONTRO QUE EL TRATAMIENTO CON U18666A INDUCE INCREMENTOS EN LA P73 QUE SE CORRELACIONAN CON APOPTOSIS, ADEMAS, EL TRATAMIENTO CON U18666A INDUCE LA ACTIVACION DE 073 CON LA MISMA CINETICA DE APARICION DE DOS MARCADORES DE ESTRES OXIDATIVO: DI-CLORO-FLUORESCEINA Y NITROTIROSINAS. EL TRATAMIENTO DE ESTAS CELULAS CON IMATINIB, UN INHIBIDOR DE C-ABL, Y CON N-ACETIL-CISTEINA, UN POTENTE ANTIOXIDANTE, PROTEGE A LAS CELULAS DE LA APOPTOSIS. LOS NIVELES DE C-ABL, P73 Y NITROTIROSINAS SE ENCUENTRAN AUMENTADOS EN LAS CELULAS N2A CON BAJA EXPRESION DE NPC1. ESTOS DATOS, EN CONJUNTO, CORRELACIONAN LA APARICION DE ESTRES OXIDATIVO CON LA ACTIVACION DEL MODULO C-ABL/P73 EN CELULAS CON FENOTIPO NPC, SUGIRIENDO QUE EL ESTRES OXIDATIVO ES EL PRINCIPAL ESTIMULO QUE ACITIVA AL MODULO C-ABL/P73 EN LAS NEURONAS NPC. IN VIVO SE ENCONTRO QUE TANTO C-ABL COMO P73 SE EXPRESAN EN EL CEREBELO DE RATONES NPC, UNA DE LAS AREAS DEL CEREBRO MAS AFECTADAS EN ESTA ENFERMEDAD. EN LOS ANIMALES NPC, LA EXPRESION CEREBELAR DE P73-FOSFORILADA (ACTIVADA) COLOCALIZA CON C-ABL Y CASPASA 3 ACTIVADA EN LAS NEURONAS DE PURKINJE. LOS NIVELES DE EXPRESION DE GENES BLANCOS DE LA P73 TAMBIEN SE ENCUENTRAN AUMENTADOS EN LOS CEREBELOS NPC. ESTOS RESULTADOS INDICAN QUE EL MODULO C-ABL/P73 SE ENCUENTRA ACTIVADO EN LOS CEREBELOS DE RATONES NPC. ADEMAS SE ENCONTRO QUE EL PERFIL DE EXPRESION GENICO DE LOS CEREBELOS NPC ES INDICATIVO DE ESTRES OXIDATIVO. ES MAS, SE ENCONTRO QUE C-ABL, P73 Y LA CASPASA 3 ACTIVADA COLOCALIZA CON LA TINCION PARA NITROTIROSINAS EN LOS CEREBELOS NPC. ESTOS DATOS DEMUESTRAN LA ACTIVACION DE LA VIA PROAPOPTOTICA C-ABL/P73 EN LOS CEREBELOS NPC Y LOS CORRELACIONA CON MARCADORES DE ESTRES OXIDATIVO IN VIVO. PARA ENTENDER LA RELEVANCIA DEL MODULO PROAPOPTOTICO C-ABL/P73 IN VIVO, SE INHIBIO LA QUINASA C-ABL POR MEDIO DEL USO DE IMATINIB. EL TRATAMIENTO CON IMATINIB REDUJO LOS NIVELES DE RNA MENSAJERO DE GENES BLANCOS DE P73, INCREMENTO LA SOBREVIDA DE LAS NEURONAS DE PURKINJE, INHIBIENDO LA APOPTOSIS CEREBELAR EN NPC. JUNTO CON ESTO, EL TRATAMIENTO CON IMATINIB REDUJO LA PERDIDA DE PESO, MEJORO LOS SINTOMAS NEUROLOGICOS Y LA SOBREVIDA DE LOS RATONES NPC. EN CONCLUSION, EL TRATAMIENTO CON IMATINIB BLOQUEA LA APOPTOSIS CEREBELAR Y MEJORA LOS SINTOMAS NEUROLOGICOS DE LOS RATONES NPC. RESUMIENDO, LOS RESULTADOS PRESENTADOS EN ESTA TESIS DEMUESTRAN QUE EL MODULO C-ABL/P73 PARTICIPA EN LA NEURODEGENERACION EN NPC, CORRELACIONANDO SU ACTIVACION CON MARCADORES DE ESTRES OXIDATIVO IN VITRO E IN VIVO. ADEMAS, SE DEMOSTRO QUE EL USO DE INHIBIDORES DE LA C-ABL ES UTIL PARA RETRASAR LA PROGRESION DE LA ENFERMEDAD. CON ESTOS RESULTADOS SE IDENTIFICO UN NUEVO BLANCO POTENCIAL PARA EL TRATAMIENTO DE ESTA DEVASTADORA ENFERMEDAD. |