| LA ACTIVIDAD SINAPTICA DE NEURONAS INDUCE TANTO FORMACION DE ESPECIES REACTIVA DE OXIGENO (ROS) COMO TRANSITORIAS DE CALCIO, AMBAS SEÑALES PARTICIPAN EN NUMEROSOS PROCESOS CELULARES. ESTA TESIS SE CENTRA EN DETERMINAR EL EFECTO DE LA ESTIMULACION ELECTRICA DE NEURONAS SOBRE LA GENERACION DE ROS Y LOS MECANISMOS INVOLUCRADOS EN SU GENERACION, EN PARTICULAR LA PARTICIPACION DE LA SEÑALIZACION POR CALCIO. ADEMAS QUISIMOS DETERMINAR SI LOS ROS PRODUCIDAS POR ESTIMULACION ELECTRICA SON CAPACES DE MODULAR LA EXPRESION GENICA. PARA ESTO ULTIMO ESTUDIAMOS DOS FACTORES DE TRANSCRIPCION QUE PARTICIPAN EN LA FISIOLOGIA NEURONAL: NFKB, FACTOR QUE ES REGULADO POR ROS EN VARIOS TIPOS CELULARES, Y NFAT, FACTOR REGULADO POR LA SEÑALIZACION POR CALCIO. TAMBIEN INVESTIGAMOS SI ESTE TIPO DE ESTIMULACION ES CAPAZ DE MODULAR LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS HAT Y HDAC QUE MODIFICAN EL ESTADO DE ACETILACION DE LAS HISTONAS PARTICIPANDO EN LOS CAMBIOS EN LA ESTRUCTURA DE LA CROMATINA. DETERMINAMOS QUE LA ESTIMULACION ELECTRICA DE NEURONAS EN CULTIVOS PRIMARIO INDUCE PRODUCCION DE H2O2. AL ESTUDIAR LAS FUENTES DE ROS IMPLICADAS EN SU PRODUCCION, ENCONTRAMOS QUE LA PRODUCCION DE H2O2 ES BLOQUEADA POR EL PEPTIDO INHIBIDOR DE LA NADPH OXIDADA, GP91. ADEMAS, LA GENERACION DE H2O2 ES DEPENDIENTE DE LA ACTIVIDAD DEL RECEPTOR NMDA Y DE LA SALIDA DE CALCIO A TRAVES DEL RECEPTOR DE RYANODINA (RYR), DETERMINADO CON LA UTILIZACION DE MK-801 Y RYANODINA, RESPECTIVAMENTE. DETERMINAMOS QUE LA ESTIMULACION ELECTRICA DE NEURONAS INDUCE ACTIVACION DE LOS FACTORES DE TRANSCRIPCION NFKB Y NFAT POR ANALISIS CON GENES REPORTEROS. ESTUDIOS MAS DETALLADOS SOBRE NFKB DEMOSTRARON QUE EL ESTIMULO ELECTRICO INDUCE TRANSLOCACION DE LA SUBUNIDAD P65 DE NFKB Y ACTIVACION DE LA VIA CLASICA DE NFKB. LA TRANSLOCACION DE P65 AL NUCLEO POR ESTIMULACION ELECTRICA ES DEPENDIENTE TANTO DE LA SALIDA DE CALCIO A TRAVES DEL RYR COMO DE LA PRODUCCION DE ROS. LA PREINCUBACION CON EL AGENTE ANTIOXIDANTE N-ACETIL CISTEINA, LA INHIBICION DE LAS FUENTES DE ROS CON DPI, LA INHIBICION DE LA ACTIVIDAD DE LA NOX Y LA INHIBICION DEL RECEPTOR DE RYANODINA, IMPIDEN LA TRANSLOCACION DE P65 AL NUCLEO. ADEMAS, DETERMINAMOS QU ELA ACTIVIDAD DE LOS FACTORES NFKB Y NFAT ES AUMENTADA POR H2O2 EXOGENO. SE DETERMINO LA PARTICIPACION DE LA SALIDA DE CALCIO A TRAVES DEL RYR EN LA ACTIVACION DEL FACTOR NFKB POR H2O2 EXOGENO. ESOTSO RESULTADOS INDICAN QUE LA ESTIMULACION FISIOLOGICA DE NEURONAS DINDUCE PRODUCCION DE ROS A TRAVES DE LA ACTIVIDAD DE NOX, POR MECANISMOS DEPENDIENTES DE CALCIO, Y QUE LAS ROS PARTICIPAN EN LA ACITVAICON DE NFKB. |