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RESUMEN
El desarrollo de programas de erradicación de tuberculosis animal demanda la implementación de procedimientos rápidos y específicos para la identificación del patógeno causante de la tuberculosis bovina (TBB). La diferenciación de los miembros del complejo TBC es imprescindible para la aplicación de estos programas así como para el tratamiento individual de pacientes. Los métodos actuales son lentos (cultivo), inespecíficos o incapaces de detectar animales anérgicos o animales infectados por cepas relacionadas (tuberculina). En general se utiliza la capacidad de metabolizar glicerol o piruvato en el medio de L�wentein Jensen, preferencia de oxígeno (aerófilo vs microaerófilo), acumulación de niacina, actividad de nitrato reductasa, morfología de la colonia y resistencia a TCH y PZA. El reciente desarrollo de las técnicas de biología molecular tales como RFLP, Southern blot y PCR en conjunto con el avance del proyecto de genoma microbiano, ha permitido el uso de estrategias de genotipificación basadas en la amplificación diferencial de regiones del DNA, propias de cada especie integrante del complejo.
En nuestro país, el desarrollo de programas epidemiológicos, así como el diagnóstico oportuno de esta enfermedad, se ha visto entorpecido por la falta de profesionales y laboratorios capacitados para la incorporación de dichos procedimientos diagnósticos, actualmente en uso en los países desarrollados. A esto se suma la necesidad de contar con una política gubernamental que incorpore programas de vigilancia epidemiológica y certificación sanitaria de animales y rebaños, la cual debe estar sustentada por tecnologías que den seguridad, exactitud y mejoren el diagnóstico de esta enfermedad tanto en animales como en el hombre.
El Instituto de Bioquímica de la U.A.Ch. (http://www.ciencias.cl), en el marco del proyecto Fondef D99I1096, ha desarrollado y evaluado a terreno, un procedimiento de Elisa- PCR para el diagnóstico de M. bovis, el que se ha constituido en un kit diagnóstico para TBB. Los resultados obtenidos a la fecha, indican que este ensayo (24 hrs.). de duración) es altamente sensible, mostrando un 95% de eficiencia respecto al cultivo considerado como "gold standard" (duración 30-60 días). Comparativamente, el test de la tuberculina arrojó un 73,8 % de sensibilidad, mostrando un 38% de falsos negativos. Estos resultados demuestran que la incorporación de la técnica de PCR como herramienta diagnóstica oficial en matadero, posibilitará la rápida identificación de animales y predios infectados, con la consecuente aplicación oportuna de estrategias sanitarias de erradicación y vigilancia. Sin embargo, su utilidad dependerá de la validación diagnóstica en terreno, la cual demanda aplicar este ensayo a un número mayor de muestras biológicas aisladas de animales provenientes de las distintas regiones del país, para lograr una relación de tres animales sanos por cada animal infectado. Por otra parte, un programa de erradicación debe disponer de las herramientas que permitan identificar todas las variantes genéticas nacionales de M. bovis así como también, las que pudieran ingresar de otras regiones geográficas.
En consecuencia, este proyecto pretende dar respaldo diagnóstico al proceso oficial de certificación sanitaria de tuberculosis bovina para lo cual propone: 1. validar el ensayo de Elisa- PCR para el diagnóstico de tuberculosis bovina y 2. Genotipificación de aislados nacionales de M. bovis.
Ambos objetivos constituirán una contribución necesaria al negocio de certificación sanitaria y de programas epidemiológicos. |