|
RESUMEN
Las complicaciones crónicas de la diabetes afectan a un gran porcentaje de los diabéticos. La nefropatía diabética (ND) y el compromiso cardiovascular son las complicaciones más importantes, afectando la calidad de vida y provocando un aumento de la morbi-mortalidad de estos pacientes. El desarrollo de ND no sólo es dependiente del control metabólico y de la presión arterial, también es importante, entre otros, el factor genético. No todos los diabéticos mal controlados presentan ND; y algunos a pesar de tener buen control desarrollan ND. Además, la ND es más prevalente en ciertas familias, indicando que la susceptibilidad genética es un factor primordial en su mecanismo patogénico.
Actualmente se dispone de la determinación de microalbuminuria para detectar la ND, sin embargo, este parámetro bioquímico corresponde a nefropatía incipiente, y ya existe daño renal. Algunos microalbuminúricos, en tratamiento, evolucionan a insuficiencia renal terminal; por lo que la microalbuminuria no sería un marcador tan precoz de ND.
La nefrina, es un componente proteico esencial de la barrera de filtración glomerular. Reportes recientes indican que la nefrina es un buen indicador de compromiso renal en enfermedades genéticas y adquiridas. Se ha encontrado en biopsias renales una disminución de la nefrina, de los podocitos, correlacionada con la presencia de proteinuria. En diabéticos tipo 1 (DM1) con ND aparece nefrina en la orina, comprobándose una relación entre nefrinuria y daño renal. Los controles normales no presentan nefrinuria. Estos antecedentes indican que la detección de nefrinuria podría constituir un marcador bioquímico precoz de ND.
Se ha clonado y secuenciado el gen de nefrina e identificado más de 30 de mutaciones relacionadas con el síndrome nefrótico congénito (CNF); además se han consignado más de 100 polimorfismos o SNPs. La susceptibilidad a ND podría estar determinada por variantes genéticas en las regiones codificantes del gen de nefrina y constituir marcadores genéticos de ND.
La identificación de un marcador a nivel genético y/o bioquímico de daño renal, sería de gran utilidad para el pronóstico de ND en diabéticos y es fundamental para un diagnóstico precoz de ND que permita tomar conductas terapéuticas preventivas de esta patología de gran morbi-mortalidad.
Objetivo general. Correlacionar la presencia de nefrina en la orina (nefrinuria) y polimorfismos genéticos de nefrina con la presencia de daño renal en pacientes diabéticos tipo 1 y tipo 2 para la detección precoz de nefropatía diabética.
Los objetivos específicos planteados son pesquisar variantes genéticas de la región codificante del gen de nefrina en la población chilena sana, diabética tipo 1 y tipo 2 normo- micro y macroalbuminúricos y nefrópata no diabética. Relacionar los niveles de albuminuria en los distintos grupos de pacientes con la presencia de determinados polimorfismos genéticos del gen de nefrina y de nefrinuria. Determinar si estas alteraciones son propias de los diabéticos tipo 1 y/o tipo 2. Desarrollar una técnica de medición de nefrinuria basada en el análisis de la proteína por western blot. Desarrollar una técnica de aplicación basada en PCR (reacción en cadena de la polimerasa) para variantes genéticas de la nefrina asociadas a daño renal. Las técnicas desarrolladas de nefrina podrán ser realizadas en laboratorios clínicos de hospitales de nivel A.
Pacientes y Métodos: Se seleccionarán pacientes atendidos en la Unidad de Diabetes del Hospital San Juan de Dios y la Sección de Nefrología del Hospital Clínico U. de Chile. Se formarán 8 grupos de 20 individuos c/u que corresponderán a:
1) Controles sanos.
2) DM1 normoalbuminúricos.
3) DM1 microalbuminúricos.
4) DM1 macroalbuminúricos.
5) DM2 normoalbuminúricos.
6) DM2 microalbuminúricos.
7) DM2 macroalbuminúricos
8) Nefrópatas no diabéticos.
A todos ellos se les practicarán los exámenes clínicos (IMC, presión arterial) y bioquímicos: glicemia, HbA1c, creatinina, albúmina, colesterol total, triglicéridos, HDL, LDL (por fórmula de Friedewald) y electrolitos (Na y K). La albuminuria se determinará con anticuerpos monoclonales en el equipo DCA 2000 de Bayer, en ausencia de infección del tracto urinario y falla cardíaca. Los análisis de nefrinuria se realizarán mediante western blot. Se tomará 1 muestra de sangre periférica para la extracción de DNA y su análisis de polimorfismos mediante SSCP-PCR y secuenciación de DNA del gen de nefrina.
Resultados esperados: Se espera encontrar algunos polimorfismos genéticos en la región codificante del gen de nefrina. La asociación de estos polimorfismos con la nefrinuria en los pacientes nefrópatas permitirá determinar si estos polimorfismos constituyen marcadores de riesgo de ND en pacientes diabéticos. Montar técnicas de biología molecular que pueden ser aplicadas en los laboratorios clínicos, para nefrina u otras proteínas de importancia clínica. |